Πρωτόκολλα Προσδιορισμός της σύστασης των λιπιδίων σε λιπαρά οξέα με αέρια χρωματογραφία (Gas chromatography-GC)Ο προσδιορισμός της σύστασης των λιπιδίων σε λιπαρά οξέα γίνεται μετά από μεθανόληση των λιπιδίων και μετατροπή των λιπαρών οξέων στους αντίστοιχους μεθυλεστέρες. Οι μεθυλεστέρες είναι μόρια περισσότερο πτητικά και λιγότερο πολικά από τα λιπαρά οξέα. Η αντίδραση της μεθυλεστεροποίησης πραγματοποιείται σύμφωνα με τη μέθοδο AFNOR (1984):
Σε περίπου 100 mg λιπιδίων προστίθενται 10 ml μεθοξειδίου του νατρίου (1), που περιέχουν φαινολοφθαλεΐνη ως δείκτη pH, και το μίγμα θερμαίνεται μέχρι ήπιου βρασμού. Μετά από 20 min προστίθεται διάλυμα υδροχλωρικής μεθανόλης (2), μέχρις ότου το pH του μίγματος γίνει όξινο (αλλαγή χρώματος δείκτη από ερυθρό σε λευκό), και ο βρασμός συνεχίζεται για άλλα 20 min. Η αντίδραση σταματά με την προσθήκη νερού και οι μεθυλεστέρες των λιπαρών οξέων παραλαμβάνονται μετά από τριπλή εκχύλιση με εξάνιο.
Οι μεθυλεστέρες των λιπιδίων αναλύονται σε αέριο χρωματογράφο που φέρει στήλη HP-88 J8W Scientific διαστάσεων 60 m x 0,25 mm. Ως φέρον αέριο χρησιμοποιείται το ήλιο με ροή 2 ml/min. Οι συνθήκες της ανάλυσης είναι : θερμοκρασία στήλης 200 °C (ισόθερμη), θερμοκρασία συστήματος εξαέρωσης και ανιχνευτή 250 °C. Η διάρκεια της ανάλυσης είναι 20 min, ενώ τα λιπαρά οξέα ταυτοποιούνται με τη βοήθεια προτύπων διαλυμάτων μεθυλεστέρων.
(1). Το διάλυμα του μεθοξειδίου του νατρίου παρασκευάζεται διαλύοντας 1 g μεταλλικού νατρίου σε 100 ml μίγματος μεθανόλης:βενζολίου (70:30).
(2). Το διάλυμα της υδροχλωρικής μεθανόλης παρασκευάζεται προσθέτοντας στάγδην 10 ml ακετυλο-χλωρίδιου σε 125 ml μεθανόλης. Η αντίδραση είναι ισχυρά εξώθερμη.