Η λιπάση δρα επί των τριγλυκεριδίων και απελευθερώνει λιπαρά οξέα. Ο προσδιορισμός της ενεργότητας του ενζύμου λιπάση γίνεται με τιτλοδότηση.

Παρασκευή υποστρώματος

  • Παρασκευάζεται αρχικά ρυθμιστικό διάλυμα Na2HPO4/NaH2PO4 50 mM, pH=7.
  • Στη συνέχεια παρασκευάζεται γαλάκτωμα ελαιολάδου: σε 60 ml διαλύματος 5% (w/v) αραβικού κόμεος (γαλακτωματοποιητής) προστίθενται 40 ml ελαιόλαδο και το μίγμα ομογενοποιείται σε εργαστηριακό ομογενοποιητή.
  • Το υπόστρωμα ενζύμου αποτελείται από 50 ml γαλακτώματος ελαιολάδου αναμιγμένα σε 45 ml ρυθμιστικού διαλύματος.

Προσδιορισμός ενζυμικής ενεργότητας

  • 0,5 ml υγρού της καλλιέργειας (από το οποίο έχουν απομακρυνθεί τα μικροβιακά κύτταρα με διήθηση) αναμιγνύονται με 9,5 ml υποστρώματος.
  • Το μείγμα επωάζεται σε ανακινούμενο επωαστικό θάλαμο για 1 h σε Τ=28 °C.
  • Ακολουθεί τιτλοδότηση του μίγματος με διάλυμα NaOH 50 mM μέχρι pH=9.

Ως μονάδα ενεργότητας (unit, U) του ενζύμου λιπάση, ορίζεται αυθαίρετα η ποσότητα του ενζύμου που ελευθερώνει 1 μmole λιπαρών οξέων σε 1 h σε Τ=28 °C.